棉酚化学结构棉酚是存在于粗制棉籽油中的多酚类化合物，具有抑制精子发生和精子活动的作用，长期服用可导致男性不育，短期摄入量过大则易引发急性中毒，使皮肤产生剧烈的灼烧感，并伴有头晕、气喘、心慌和无力等症状。虽在制油过程中，大部分棉酚可被有效去除，但由于棉籽油价格低廉，不法商贩为了获取暴利从而偷工减料、以次充好的情况时有发生（如：2013年10月台湾媒体爆出，台湾大统长基食品公司被查出九成油品是造假“黑心油”*多含有40%的棉籽油），鉴于棉酚的毒性较大，对可能长期使用的食品（如植物油）必须严格控制，国家标准食用植物油卫生标准（GB2716?2005）规定，食用植物油中棉籽油游离棉酚含量不得超过0.国家标准GB/T5009.148?2003中提供了采用无水乙醇提取食用油中游离棉酚的测试方案，样品制备过程涉及提取、静置过夜、过滤、离心等操作，分析效率较低，且由于提取溶剂具有一定挥发性，可能影响测试结果的准确度。本方法使用双三元高效液相色谱系统（DGLC-3600），以在线固相萃取（OnlineSPE）技术对样品富集分离后再进行HPLC检测，该方法可实现样品的自动化前处理，方法快速简便（测试周期仅为10mm），灵敏度高（检测限达1mgl1），回收率好，适用于大批次样品的快速检定；同时由于SPE小柱在分析过程中可在线净化，能够多次重复使用，从而可以大大节省测试成本。

　　1实验部分1.1测试条件仪器连接图仪器：UltimateDGP3600系列，包括有带在线脱气单元的双三元梯度泵、自动进样器、带有一个六通阀的柱温箱，紫外检测器，仪器连接参见。ffi三元富集柱：AcclaimC85xm，4.6x10mm.富集录流动相：流动相A：乙腈，流动相B：异丙醇。分析泵流动相等度洗脱，乙I腈-1%磷酸（85：15）；富集泵梯度及阀切换条件：时间；（阀切换，将棉酚转载至分析柱）?1-2（阀切换，SPE柱切回到富集流路）?1-2（等度洗脱）?1-2（梯度洗脱，将高保留的油脂成份从SPE柱）1-2（上快速洗脱，活化色谱柱）?1-2（平衡色谱柱，为下一针进样做准备）?1-2（分析完成）。流速：富集泵1.0mL.min?1；分析泵1.0mL-min?1.进样量：10 xL，柱温：35尤，紫夕卜检测器：235nm. 1.2样品前处理方法5%）11.10mg，置50mL棕色量瓶中，以甲醇溶解定容至刻度，作为标准品储备液，于冰箱4T：保存（浓度200.9rmL?1）。取标准品储备液以甲醇逐级稀释为浓度标准品溶液制备：分别为40.43、19.96、10.04、5.02、1.00.1?1的标准工作溶液。样品溶液制备：准确称取样品0.5 8，置10瓜棕色量瓶中，加入异丙醇稀释定容至刻度，待测。为标样色谱图，为空白样品及样品加标色谱图。

　　2结果和讨论2.1样品前处理方法优化分别尝试采用甲醇、乙腈、异丙醇溶解样品，结果发现，样品与异丙醇相溶性较好，0.6g样品加异丙醇定容至10mL后溶液完全澄清，而甲醇、乙腈则出现明显乳光，无法充分混合；虽然正己烷等溶剂可以更好溶解样品，但与乙腈相溶性不好，故*终选择异丙醇做为样品稀释溶剂。

　　2.2色谱柱选择富集柱选择：棉酚属多酚类物质，极性相对较强，经考察AcclaimC8、AcdaimC18、AcdaimPAn等SPE小柱对其保留行为的差异不大，但为了尽可能减少油脂成份在SPE小柱上的洗脱时间，提高分析速度，*终优选AcclaimC8作为在线SPE柱。

　　分析柱选择：棉酚对光、热不稳定，容易产生降解物，在对照品的分析过程中发现，普通C18色谱柱对棉酚中杂质分离效果不佳，而AcclaimPAn对棉酚及其杂质的选择性较好，故*终选择AcclaimPAn色谱柱作为分析柱。

　　取浓度10.04i.mL-1的对照品溶液重复进样6针，保留时间RSD为0.1%，色谱峰面积RSD为1.2%.取不同浓度棉酚标准工作溶液依次进样10pL分析，在1.0?200.91rmL?1范围，以棉酚浓度和峰面积进行线性回归，标准曲线为A=1. 6928，相关系数1.0000.取浓度为0. 05ixg.mL?1的棉酚对照品溶液，进样10 X分析，棉酚峰高值约为噪音值3倍，本方法检出限为0.5ng；*低检出浓度为1标准品测定色谱图（10.样品及加标样品色谱图（加标量为100 2.3方法的重现性及线性、检出限2.4棉酚稳定性取棉酚对照品溶液于60水浴中密闭加热，分别于加热后0min、30min、60min取出，放冷至室温后进样10pL分析。结果发现，棉酚峰面积持续下降，并在相对保留时间0. 8min处产生1个快速增加的杂质峰（，60min样品中与棉酚峰分离度为2.26）。为了确保测定准确性，对照品和待测溶液后，均应临用新配，室温较高时建议开启进样盘温控模块适当降温，同时也说明建立棉酚的快检方法确有必要。

　　2.5实际样品的分析取市售的食用调和油、芝麻油、花生油、菜籽油、玉米油、芥末油等样品照前处理方法制样后测试，结果均未检出棉酚（包括其降解物）。取食用调和油进行加标回收试验，结果加样回收率均在98% 3结论本方法使用在线固相萃取方法对食用油中棉酚进行测定，操作简便易行，减少了手动操作步骤，提高了方法重现。性和准确度，适用于常见食用油样品的快速检测。